最小抑菌濃度是指在體外實(shí)驗(yàn)條件下，能夠wan全抑制微生物生長(zhǎng)繁殖所需待測(cè)藥物或抑菌物質(zhì)的zui低濃度，是評(píng)價(jià)抗菌活性、篩選抑菌制劑、制定抑菌使用劑量的核心實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于食品防腐、日化抑菌、醫(yī)藥抗菌、環(huán)境消殺等領(lǐng)域。

一、稀釋法

(一)肉湯稀釋法

原理：將抗菌藥物在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行一系列倍比稀釋，使藥物濃度呈指數(shù)遞減，然后向每管含有不同濃度藥物的培養(yǎng)基中加入等量的試驗(yàn)菌懸液，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間培養(yǎng)后，觀察微生物的生長(zhǎng)情況，以肉眼觀察無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的zui低藥物濃度即為該藥物對(duì)受試菌的最小抑菌濃度。

操作流程：首先準(zhǔn)備適宜的液體培養(yǎng)基，如用于細(xì)菌檢測(cè)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)。將抗菌藥物用培養(yǎng)基稀釋成一系列濃度，如1024μg/mL、512μg/mL、256μg/mL等，一般稀釋8-10個(gè)濃度梯度。在無(wú)菌試管中依次加入不同濃度的藥物稀釋液，每管1mL。接著向每管加入0.1mL含菌量為5×10?-5×10?CFU/mL的試驗(yàn)菌懸液，同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照管(不加藥物，只含菌懸液和培養(yǎng)基)和陰性對(duì)照管(只含培養(yǎng)基)。將試管置于適宜溫度下培養(yǎng)，細(xì)菌通常在35℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，真菌在25℃培養(yǎng)24-48小時(shí)，觀察試管內(nèi)液體渾濁情況，記錄MIC。

(二)瓊脂稀釋法

原理：將不同濃度的抗菌藥物均勻混入瓊脂培養(yǎng)基中，制成含藥瓊脂平板。然后將一定量的試驗(yàn)菌懸液點(diǎn)種或涂布在含藥平板表面，培養(yǎng)后觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，以在瓊脂平板上沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的zui低藥物濃度作為最小抑菌濃度。

操作流程：先配制不同濃度的抗菌藥物溶液，將其按一定比例加入融化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基中，充分混勻，倒入無(wú)菌平皿制成含藥瓊脂平板。取適量試驗(yàn)菌懸液(通常為1-2μL，含菌量約10?CFU)點(diǎn)種在含藥平板表面，或用涂布器將菌懸液均勻涂布于平板。將平板倒置，在適宜溫度下培養(yǎng)，觀察菌落生長(zhǎng)情況，確定MIC。

二、擴(kuò)散法

紙片擴(kuò)散法原理：將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種試驗(yàn)菌的瓊脂平板表面，藥物在瓊脂中向周圍擴(kuò)散，其濃度呈梯度遞減，在紙片周圍一定距離內(nèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制，從而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小與藥物濃度、藥物對(duì)細(xì)菌的抑菌活性以及細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性相關(guān)，通過(guò)測(cè)量抑菌圈直徑，并與標(biāo)準(zhǔn)值比較，可間接推斷出最小抑菌濃度范圍。

操作流程：首先制備瓊脂平板，將融化的瓊脂培養(yǎng)基倒入無(wú)菌平皿，使其厚度均勻。用無(wú)菌棉簽蘸取菌懸液，在瓊脂平板表面均勻涂布，確保細(xì)菌均勻分布。待平板表面水分稍干后，用無(wú)菌鑷子將含有不同抗菌藥物的紙片貼于平板表面，輕輕按壓使其與瓊脂緊密接觸。將平板倒置，在適宜溫度下培養(yǎng)16-18小時(shí)(細(xì)菌)或24-48小時(shí)(真菌)。用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑，根據(jù)CLSI(臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì))或EUCAST(歐洲抗菌藥物敏感性試驗(yàn)委員會(huì))制定的標(biāo)準(zhǔn)判斷細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性，推斷MIC范圍。